Master GREEN 200 Manual de usuario Pagina 5
- Pagina / 56
- Tabla de contenidos
- MARCADORES
Valorado. / 5. Basado en revisión del cliente
v
Template Quantity. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3-5
Guidelines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3-6
Preparing the Reactions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3-6
Thermal Cycling . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3-9
4 Optimizing Primer Concentrations
Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-1
About This Chapter. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-1
In This Chapter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-1
Optimizing Primer Concentrations for PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-2
Overview. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-2
Optimizing Primer Concentrations for PCR. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-2
PCR Master Mix for Primer Optimization . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-3
Thermal Cycling Parameters for Primer Optimization. . . . . . . . . . . . 4-4
Confirm the Absence of Nonspecific Amplification . . . . . . . . . . . . . 4-4
Optimizing Primer Concentrations for One-Step RT-PCR . . . . . . . . . . . . . . 4-5
Overview. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-5
Reducing Nonspecific Amplification . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-5
Optimizing Primer Concentrations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-5
One-Step RT-PCR Master Mix for Primer Optimization . . . . . . . . . . 4-6
Confirm the Absence of Nonspecific Amplification . . . . . . . . . . . . . 4-8
Optimizing Primer Concentrations for Two-Step RT-PCR . . . . . . . . . . . . . . 4-9
Overview. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-9
Optimizing Primer Concentrations for Two-Step RT-PCR. . . . . . . . . 4-9
Two-Step RT-PCR Master Mix for Primer Optimization . . . . . . . . . 4-10
Confirm the Absence of Nonspecific Amplification . . . . . . . . . . . . 4-11
5 Data Analysis
Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5-1
About This Chapter. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5-1
In This Chapter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5-1
Absolute and Relative Quantitation of Target DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5-2
Overview. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5-2
- Green PCR Master Mix 1
- Contents 3
- 3 Reverse Transcription 4
- 5 Data Analysis 5
- A References 6
- B Technical Support 6
- Introduction 1 7
- Purpose of the Kit 8
- Materials and Equipment 9
- RISM™ 384-Well Clear Optical 10
- RISM™ Optical Adhesive 10
- Storage and 11
- Stability 11
- Documentation 12
- User Attention 12
- Chemical Hazard 12
- Hazard Warning 13
- Site Preparation 13
- About MSDSs 13
- Chemical Waste 13
- Overview 15
- Hot Start PCR 15
- AmpliTaq Gold 15
- DNA Polymerase 15
- False Positives 16
- Optional Use of 16
- AmpErase UNG 16
- Introduction 1-11 17
- 1-12 Introduction 18
- Introduction 19
- Dissociation Curve 19
- Using Dissociation 19
- Using Agarose 20
- Gels to Check PCR 20
- Product Purity 20
- Identifying Target 22
- Sequence and 22
- Amplicon Size 22
- Designing Primers 22
- Selecting an 23
- Amplicon Site for 23
- Genomic DNA 23
- Ordering Reagents 24
- Quantitating 24
- Reverse 25
- Transcription 3 25
- Guidelines 26
- Two-Step RT-PCR 27
- RT Reaction Mix 27
- Performing RT 28
- Reactions 28
- Recommended 29
- Template 29
- Template Quality 29
- Template Quantity 29
- Preparing the 30
- CAUTION! 31
- (continued) 32
- Thermal Cycling 33
- Optimizing Primer 35
- Concentrations 4 35
- Concentrations for 36
- PCR Master Mix 37
- Optimization 37
- Activation 38
- One-Step RT-PCR 40
- Master Mix for 40
- Confirm the 42
- Absence of 42
- Nonspecific 42
- Amplification 42
- Data Analysis 5 47
- 5-2 Data Analysis 48
- Interpreting the Results 49
- References A 51
- Technical Support B 53
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