Master GREEN 200 Manual de usuario Pagina 3
- Pagina / 56
- Tabla de contenidos
- MARCADORES
Valorado. / 5. Basado en revisión del cliente
Contents
iii
1 Introduction
Overview . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-1
About This Chapter. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-1
In This Chapter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-1
Purpose of the Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-2
About the Kit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-2
About This Protocol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-2
Materials and Equipment. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-3
Description of Master Mix . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-3
Materials Required but Not Supplied . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-3
Storage and Stability. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-5
Safety . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-6
Documentation User Attention Words . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-6
Chemical Hazard Warning . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-6
Chemical Waste Hazard Warning . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-7
Site Preparation and Safety Guide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-7
About MSDSs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-7
Ordering MSDSs. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-8
Preventing Contamination and Nonspecific Amplification. . . . . . . . . . . . . . 1-9
Overview. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-9
Hot Start PCR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-9
AmpliTaq Gold DNA Polymerase . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-9
False Positives. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-10
Optional Use of AmpErase UNG . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-10
Fluorescent Contaminants. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-11
Prevention of PCR Product Carryover . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-11
General PCR Practices . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1-11
- Green PCR Master Mix 1
- Contents 3
- 3 Reverse Transcription 4
- 5 Data Analysis 5
- A References 6
- B Technical Support 6
- Introduction 1 7
- Purpose of the Kit 8
- Materials and Equipment 9
- RISM™ 384-Well Clear Optical 10
- RISM™ Optical Adhesive 10
- Storage and 11
- Stability 11
- Documentation 12
- User Attention 12
- Chemical Hazard 12
- Hazard Warning 13
- Site Preparation 13
- About MSDSs 13
- Chemical Waste 13
- Overview 15
- Hot Start PCR 15
- AmpliTaq Gold 15
- DNA Polymerase 15
- False Positives 16
- Optional Use of 16
- AmpErase UNG 16
- Introduction 1-11 17
- 1-12 Introduction 18
- Introduction 19
- Dissociation Curve 19
- Using Dissociation 19
- Using Agarose 20
- Gels to Check PCR 20
- Product Purity 20
- Identifying Target 22
- Sequence and 22
- Amplicon Size 22
- Designing Primers 22
- Selecting an 23
- Amplicon Site for 23
- Genomic DNA 23
- Ordering Reagents 24
- Quantitating 24
- Reverse 25
- Transcription 3 25
- Guidelines 26
- Two-Step RT-PCR 27
- RT Reaction Mix 27
- Performing RT 28
- Reactions 28
- Recommended 29
- Template 29
- Template Quality 29
- Template Quantity 29
- Preparing the 30
- CAUTION! 31
- (continued) 32
- Thermal Cycling 33
- Optimizing Primer 35
- Concentrations 4 35
- Concentrations for 36
- PCR Master Mix 37
- Optimization 37
- Activation 38
- One-Step RT-PCR 40
- Master Mix for 40
- Confirm the 42
- Absence of 42
- Nonspecific 42
- Amplification 42
- Data Analysis 5 47
- 5-2 Data Analysis 48
- Interpreting the Results 49
- References A 51
- Technical Support B 53
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